Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者十分困难缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现呼吸道自身免疫催化到再次出现1改进型冠心病药理学病因的成果率在儿童时期就有很好的描绘出，多个呼吸道自身免疫催化阳性的儿童里面有70%在血清变换后10短期内患上冠心病，而随访15年的儿童这一比率缩减到84%。整体而言，占药理学1改进型冠心病一半以上的改进型1改进型冠心病的发病机制还没有得到合理的分析。

越来越多的人开始运用于仍须系统来定义1改进型冠心病的成果：个纤在再次出现多种呼吸道自身免疫催化时踏入第1期中，再次出现血糖异常时踏入第2期中，再次出现病因时踏入第3期中。一些多发呼吸道自身免疫催化阳性的个纤，在1期和2期，成果较极快，并发展为发病的1改进型冠心病。我们之后描绘出了一两组在首次检查到多种呼吸道自身免疫催化取样后将近10年无冠心病的极极快成果者，这两组病变人数少，但特征更加具体。随后，我们发现呼吸道自身淋巴细胞专一性CD8+T本站粒纤催化在成果比较极快的病变里面基本不存在，但在近期发病和长期以来存在的冠心病病变里面很容易检查到。这也许表明，与成果病变相对来说，这些病变自身免疫催化的通气减弱。

早期分析表明，尽管通气性T本站粒纤(Treg)比例也就是说，但冠心病病变存在一些功能性局限性，其里面有数对IL-2的催化支配能力降低。此外，冠心病病变里面的物理现象CD4+T本站粒纤也许对通气更具抵抗性，展示出为物理现象T本站粒纤的抑制作用减极快，自然地显现出的Treg和纤外显现出的游离Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T本站粒纤里面IL-2催化减极快。本分析的目的是描绘出了CD4+通气性T本站粒纤(Treg)在一小群极比较极快成果者里面的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以一些人蓝本的平行分析，在21岁下述确诊的病变亲人里面检查1改进型冠心病的危险状况。我们之后描绘出了长期以来比较极快成果者的特征，他们保有多重呼吸道自身免疫催化阳性大约10年，但没有再次出现冠心病的药理学病因，极快性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保有无冠心病并愿意共享大量肾脏取样的比较极快成果者确立T和B本站粒纤功能性统计分析。在现期中的分析里面，8名极快成果者(SP两组)，里面位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的呼吸道自身免疫催化阳性。所有的发起者都处于1改进型冠心病成果的1期，尽管一些人随后一落千丈了呼吸道自身免疫催化对某些淋巴细胞的阳性催化，然而，一名病变现在处于2期将近6年，但没有再次出现药理学病因，一名病变被诊断为冠心病，该实验者72岁，在野外试验取样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析里面对该NADP同步进行了单独检验。分离外周血单个核催化本站粒纤(PBMCs)，采用多参数流式本站粒纤法术和T本站粒纤抑制作用试验检验NADP里面Treg的振幅、表改进型和功能性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无都由聚类统计分析，检验Treg表改进型。

结果：与有益NADP相对来说，来自极快成果纤的潜意识CD4+T本站粒纤的都由聚类推测，游离的潜意识CD4+ Treg振幅缩减，与利尿剂游离的TNFR相关蛋白(GITR)隐含缩减有关。一名HbA1c下降时的病变与成果比较极快者和匹配的比对两组相对来说，Treg磬有所不同。功能性统计分析表明，与有益NADP相对来说，来自比较极快成果纤的Treg介导的CD4+物理现象T本站粒纤抑制作用明显损坏。展示出为对物理现象CD4+T本站粒纤CD25和CD134隐含的抑制作用缩减。

左图1 全面性的表改进型统计分析推测，CD4+Treg亚改进型在极快成果链表里面缩减。由FlowSOM转化成的Treg室，汇聚在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -本站粒纤上。根据记号物隐含鉴定出10个元簇:潜意识T本站粒纤_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T本站粒纤;HLA-DR + GITR +潜意识T本站粒纤;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个不同Treg记号转化成的10个元簇的MST。每个端口都是一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在端口两组周围剪裁。每个端口里面的饼左图对此单个记号的隐含级别。(b)每个元聚类的热左图，以推测整纤记号隐含。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转化成左图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说总质量为每个metacluster罐本站左图(总质量> 0.05%)具体为HD和SP两组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T本站粒纤(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T本站粒纤(l)。黄色圆圈都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩核催化查。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 运用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg振幅的缩减是成果比较极快的徽章。分级介导(a - f)和甜菜统计分析(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T本站粒纤上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的都是性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR隐含同步进行分离，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(外缘)和SP(黑纹)两组以及NADPSP 606(黄色)里面CD25+ cd127的振幅综合左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导有界的罐本站左图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头醒目的簇被鉴别为SP和HD链表相互间的不同。(j)罐本站左图推测了在SP(黑纹)和HD(灰点)两组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的一般来说总质量(比率)。(k)概率分布推测每个簇的表改进型(粉红色)和Treg记号一般来说隐含与历史背景隐含(深蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。历史背景与所有其他簇里面记号的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩核催化查

左图3 与有益献血者相对来说，成果比较极快者潜意识treg的GITR缩减。每个潜意识CD4+T本站粒纤元簇(潜意识T本站粒纤_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T本站粒纤;HLA-DR + GITR +潜意识T本站粒纤;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个隐含记号的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的隐含热左图(sp606不有数在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(粉红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR隐含串联，推测概率分布(c)和综合左图(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和核催化查，p< 0.07(黄色)所有NADP有数，p< 0.05(深蓝色)NADPSP 606和匹配的HD不有数在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从分级介导，从所有HD(粉红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)串联，推测概率分布(e)和综合左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩核催化查

左图4 来自比较极快成果的CD4+ treg本站粒纤支配物理现象CD4+T本站粒纤的支配能力降低。SP两组用深蓝色的本站和圆圈对此，HD两组用银色的本站和圆圈对此，黄色的本站/圆圈对此NADPsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T本站粒纤同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被记号为CFSE, Treg按观察的比率氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置本站粒纤，培育3几天后同步进行流式本站粒纤法术检查。(a-d)与CD4+需要的话者一般来说应的treg培育(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑制作用%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%-。运用于阳性比对(游离的响应本站粒纤另有treg)计算抑制作用%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 物理现象CD4+T本站粒纤对比较极快成果的T本站粒纤重置的抑制作用更敏感。SP两组用深蓝色的本站和圆圈对此，HD两组用银色的本站和圆圈对此，黄色的本站/圆圈对此NADPsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T本站粒纤同步进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel记号，treg按观察的比率氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置本站粒纤，培育3几天后同步进行流式本站粒纤法术(CD25反染)和本站粒纤因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同完成培育。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑制作用百分率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分率(c)和CD134抑制作用百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推论的结论是，来自比较极快成果子的重置潜意识CD4+Treg在GITR隐含里面得到了拓展和丰富，强调了有利于分析Treg在1改进型冠心病风险个纤里面的系统性的必要性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28